鸡传染性支气管炎抗体(IBV-Ab)ELISA试剂盒

检测方法:双抗夹心法/酶联免疫方法

规格:96T/48T

反应时间:3.5h

反应性:chicken

样本体积:100μL

特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。

有效期:6个月

保存条件:2-8℃

可检测多种生物样品,包括:血清、血浆、体液如尿液、细胞培养上清液和细胞/组织裂解液等。

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中鸡传染性支气管炎抗体(IBV-Ab)的含量。

【实验原理】

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡传染性支气管炎抗体(IBV-Ab)表达。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中传染性支气管炎抗体(IBV-Ab)相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中鸡传染性支气管炎抗体(IBV-Ab)的存在与否。




【试剂盒组分】

【样本处理及要求】

1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。?

4.细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。?

5.其它生物样品:1000×g离心20分钟,取上清即可检测。?

6.样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。?

7.样品收集后若在1周内进行检测的可保存于2-8℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融。?

8.如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议先做预实验,以确定稀释倍数)。

样品稀释指导:

用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。

为避免样本中基质效应的影响,建议样本最少稀释一倍。

以上方案仅供参考,样品的稀释应有详细记录。

注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

【注意事项】

1.为确保试验结果的有效性,建议先做预实验,以确定适当的稀释倍数。?

2.酶标板袋拆封后,尽快将不用的板孔放回,并放入干燥剂,保持酶标板干燥。

3.用户在初次使用试剂盒时,应将试剂盒平衡至室温,各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。

4,TMB避光保存。

5,洗板过程非常重要,不充分的洗板易导致假阳性。

6.建议所有标准品、样本都做双份检测。

7.请保持试验过程的连续性,禁止酶标板干燥,因干燥会使酶标板上的生物成分迅速失活。

8.为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。

9.禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。

【检测步骤概要】

1) 准备所有的试剂和梯度稀释的标准品。板条加入300 μl 1×洗液静置浸泡30 秒。

2) 标准品孔加入 100 μl 2 倍倍比稀释的标准品。空白孔加入 100 μl 标准品稀释液(血清/血浆样本)或培养基(细胞培养上清样本)。

3) 血清/血浆:样本孔加入 90 μl 1×检测缓冲液和 10 μl 样本。细胞培养上清:样本孔加入 100 μl 细胞培养上清。

4) 每孔加入 50 μl 1:100 稀释的检测抗体。步骤 2、3、4 在 15 分钟内完成。

5) 封膜,室温孵育 1.5 小时。

6) 洗涤 6 次。

7) 每孔加入 100 μl 1:100 稀释的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。

8) 封膜,室温孵育 30 分钟。

9) 洗涤 6 次。

10) 每孔加入 100 μl 显色底物,避光,室温孵育 5 - 30 分钟。

11) 每孔加入 100 μl 终止液。

12) 30 分钟内,在 450 nm 波长检测 OD 值,参考波长 570 nm 或 630 nm。

【结果判断】

1. 以标准品的浓度为横坐标, OD值为纵坐标, 绘制标准曲线。 如有设置复孔,则应取其平均值计算。 以标准品的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界面既可根据样品OD值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。

特别提示:仅供科研使用,不得用于临床检验及治疗使用 ,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

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