ATP酶(ATPase)ELISA试剂盒

货号:BC8K964O

规格:48T/96T

检测范围:6 U/L?-200 U/L

使用目的:本试剂盒用于测定微生物样本中ATP酶(ATPase)活性。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中ATP酶(ATPase)水平。用纯化的ATP酶(ATPase)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入ATP酶(ATPase),再与HRP标记的ATP酶(ATPase)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ATP酶(ATPase)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中ATP酶(ATPase)活性浓度。

试剂盒组成

序号 组分 数量
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml × 1 瓶
2 酶标试剂 6ml × 1 瓶
3 酶 标 包 被 板 12 孔 × 8 条
4 样 品 稀 释 液 6ml × 1/ 瓶
5 显 色 剂 A 液 6ml × 1/ 瓶
6 显 色 剂 B 液 6ml × 1/ 瓶
7 终止液 6ml × 1 瓶
8 标 准 品 ( 720 U/L) 0.5ml×1 瓶
9 标准品稀 释液 1.5ml×1 瓶
10
封板膜 2张
11 密封袋 1个
12 说明书 1份

标本要求?

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献 进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避 免反复冻融?

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根 过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支, 用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶 标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样 品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl, 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加 待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加 样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻晃动混匀。?

3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。?

4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后 备用?

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔 加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。?

6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。?

7. 温育:操作同 3。?

8. 洗涤:操作同 5。?

9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 10 分钟.?

10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝 色立转黄色)。?

11. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔 的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐 标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线 查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓 度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样 品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀 释倍数,即为样品的实际浓度。?

注意事项?

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分 钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板 条应装入密封袋中保存。?

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中 加温助溶,洗涤时不影响结果。?

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性, 以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分 钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。?

4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如 标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品 孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定 倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀 释倍数(×n×5)。?

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。?

6.底物请避光保存。?

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须 以酶标仪读数为准.?

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处 第 5 页 共 8 页理。?

9.本试剂不同批号组分不得混用。?

保存条件及有效期?

1.试剂盒保存:;2-8℃。?

2.有效期:6 个月

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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