NCI-H322细胞(非小细胞肺癌细胞系)


一、细胞基本属性




细胞名称

NCI-H322细胞(非小细胞肺癌细胞系)


细胞别称

NCI-H322


商品货号

LM8C1131


种属来源



人




年龄性别

52岁/男


组织来源

肺


生长特性

贴壁生长


生物安全等级



1




细胞规格



1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装




支原体检测



无




培养条件



气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃

二、细胞培养操作

1)?复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在?37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。?

2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。??????????

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。??????????

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。?

3)?细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、培养注意事项?

1.?收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象?发生请及时和我们联系。?

2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需?细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由?客户自行承担。?

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度?变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。?

4.?贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm?离心 3 min,弃上?清。加 5?mL?PBS?重悬细胞,再 900 rpm-1000 rpm?离心 3 min,,用新鲜的完全培养基重悬?细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。?

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。?

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通?交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞?的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。?

7. 该细胞仅供科研使用。?

8. 备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 ????收到细胞后第一次传代建议 1:2 传代 。?

9. 注意: ?1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。

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