NK-92MI细胞(恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞STR鉴定正确)

产品信息

名称 NK-92MI细胞(恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞STR鉴定正确)
别称 NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2
种属 人
年龄(性别) 男;50岁
组织来源 外周血
生长特性 悬浮细胞
细胞形态 淋巴母细胞样
背景描述 NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中,转化是稳定的。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性;铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征:CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性;CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株NK-92细胞及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株NK-92CI都可从ATCC得到。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高,而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体,其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体。处理后6周,用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测,结果都呈阴性。
生物安全等级 2
生长培养基 MEMα+0.2mM Inositol+0.1mM β-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+12.5% HS+12.5% FBS+1% P/S
推荐传代比例 1:2-1:3
推荐换液频率 2~3次/周
冻存条件
冻存液:90% FBS+10% DMSO温度:液氮

培养条件
气相:空气,95%;CO2,5%温度:37℃

保藏机构 ATCC; CRL-2408

二、细胞接收后的处理


1)?收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于室温放置约1h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2)?离心管直接在1000RPM条件下离心5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞后,根据离心后的沉淀量进行传代,转移至T25培养瓶中后,请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

3)?悬浮细胞:传代时使用【半换液法】对细胞状态有利,因此我库建议您使用【半换液法】进行传代,刚收到细胞时建议1:2传代较为合适。

4)?备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。??收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。?

三、细胞培养操作

1)?复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含8mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

【半换液法】

悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL(不同细胞对密度要求不同,)可以维持细胞的正常生长。

【离心换液法】

如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3)?细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面?T25 瓶为例;

a)?收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。

b)?根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度1×10^6~1×10^7/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

c)?将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

四、培养注意事项

1)?细胞出现问题,予以重发情况

a)?细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发;

b)?细胞污染问题,请在收到产品3 天内,给我们提出真实的实验结果,核实后重发;

c)?常温发货的细胞静置2小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后2 天后,绝大多数细胞未存活,(需提供真实清晰的细胞状态照片),重发;

d)?干冰冻存发货的细胞复苏后2天后或常温发货的细胞静置2 小时候并且未开封,出现污染,重发;

e)?细胞活性问题,请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,和每天的细胞照片,核实后予重发;

f)?细胞收到当天以及第2,3 天请拍照,3 天未告知的,视为产品合格。4-7 天内出现问题需提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题的照片以及细胞相关操作的详细步骤,并跟技术人员沟通的,由技术人员判定为我方责任的,重发。?

2)?细胞出现问题,不予以重发的情况

a)?客户操作造成细胞污染,不重发;

b)?客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发;

c)?非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发;

d)?细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前3 天的细胞状态照片,不重发;

e)?细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发;

f)?收到细胞并发现问题与客服人员沟通的时间证明大于7 天的,不重发;

g)?视具体情况而定

五、注意事项

1.?所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2.?建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

该细胞仅供科研使用!说明书仅供参考以实际到货说明书为准!

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