AML-12-LUC细胞(小鼠肝细胞带荧光素酶)

一、细胞基本属性




细胞名称



AML-12-LUC细胞(小鼠肝细胞带荧光素酶)




细胞别称



AML-12-LUC




商品货号



LM8C0602-L




种属来源



小鼠




年龄性别



雄;?3月龄




组织来源



肝




生长特性



贴壁生长




细胞形态



上皮细胞样




背景简介



AML12(小鼠肝12)细胞系是从小鼠(CD1株?,?MT42系)转人TGF?-?alpha基因的肝细?胞中构建的。




生物安全等级



1




细胞规格



1?×?106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装




支原体检测



无




基因表达情况



albumin;?human transforming growth factor alpha?(TGF alpha);?mouse TGF?alpha.




保藏机构



ATCC;?CRL-2254?BCRC; 60326?BCRJ;?0354




培养基



D/F12+10%FBS+1%ITS+40ng/mL地塞米松+1%P/S




培养条件



气相?:95%空气+5%二氧化碳;温度:?37℃




冻存条件



无血清冻存液?,液氮储存




倍增时间



~37小时




STR鉴定位点




?

细胞筛选:

该细胞为已经稳定转染LUC的细胞,随细胞传代次数的增加,其LUC荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。

细胞经过20μg/ml嘌呤霉素筛选,平时培养可维持10μg/ml嘌呤霉素

二、细胞培养操作

1)复苏细胞: ?以下细胞培养冻存处理仅供参考?,具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1?mL细胞悬液的冻存管在?37℃水浴中迅速摇晃解冻?,加4?mL培养基混合均匀。在1000?rpm条件?下离心3?min?,弃去上清液?,加1-2?mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶????中培养过夜(或将细胞悬液加入6?cm皿中?,加入约4?mL完全培养基?,培养过夜)?。第三天换液并检查细??胞密度。??

2)细胞传代: ?如果细胞密度达 80%-90%?,即可进行传代培养。?a、弃去培养上清?,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1?mL消化液(?0.25%Trypsin-0.02%EDTA)?于培养瓶中?,使消化液浸润所有细胞?,将培养瓶置于???37℃培养箱中消化1?-3min(视细胞消化情况而定)?,然后在显微镜下观察细胞消化情况?,若细胞大部分?变圆并脱落?,迅速拿回操作台?,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离?心管中?,?1000?rpm离心5?min?,弃去上清液?,补加1-2?mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8?mL培养基的新皿中或者瓶中?,置于培养箱中培养。??

3)细胞冻存:?待细胞生长状态良好时?,可进行细胞冻存。下面?T25?瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液?,装入无菌离心管中?,?1000?rpm条件下离心4?min?,弃去上清液?,用PBS清洗?一遍?,弃尽PBS?,进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液?,使细胞密度5?×?106?~?1?×?107/mL?,轻轻混匀?,每支冻存管冻存?1mL细胞悬液?,注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱?,?24?h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

?三、培养注意事项

1?.?收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好?,培养液是否有漏液?、浑浊等现象?,若有上述现象 发生请?及时和我们联系。?

2?.?仔细阅读细胞说明书?,?了解细胞相关信息?,?如细胞形态?、?所用培养基?、?血清比例、?所需 细胞因?????子等?,确保细胞培养条件一致?,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题?,责任由 客户自行承担。?

3?.?用?75%酒精擦拭细胞瓶表面?,?显微镜下观察细胞状态。?因运输问题?,?部分细胞由于温度 变化及?剧烈碰撞死亡破碎形成碎片?,是正常现象。观察好细胞状态后?,?75%酒精消毒瓶壁将?T25?瓶置于37℃培养箱放置?2-4h。?

4.?贴壁细胞可以消化?,悬浮细胞直接混匀收集细胞?,?900?rpm-1000?rpm?离心?3?min?,弃上 清。加5?mL?PBS?重悬细胞?,再 900?rpm-1000?rpm?离心?3?min?,?,用新鲜的完全培养基重悬 细胞?,并接种?到新的培养瓶或培养皿中?,置于培养箱中进行培养。?

5.?请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。?

6.?建议客户收到细胞后前?3?天各拍几张细胞照片?,记录细胞状态?,便于和我司技术部沟通 交流。?由?于运输的原因?,个别敏感细胞会出现不稳定的情况?,请及时和我们联系?,?告知细胞?的具体情况?,?以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。?

7.?该细胞仅供科研使用。

8. 备注?:运输用的培养基?(灌液培养基) 不能再用来培养细胞?,请换用按照说明书细胞培?养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 ????收到细胞后第一次传代建议?1:?2?传代?。?

9.?注意:??1:2?传代就是?1?个?T25?瓶传?2?个?T25?瓶或者?2?个?6cm?皿。不是?1?个?T25?瓶传?2?个?10cm?皿。

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