MH7A细胞(人正常关节滑膜成纤维细胞)

一、细胞基本属性
细胞名称 MH7A细胞(人正常关节滑膜成纤维细胞)
细胞别称 MH7A
商品货号 LM8C1374
种属来源 人
年龄性别 女;53岁
组织来源 滑膜
生长特性 贴壁生长
细胞形态 成纤维细胞样
背景简介 -
生物安全等级 -
细胞规格 1×10^6cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测 无
培养基 RPMI1640+10%FBS+1%Anti-Anti
培养条件 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件 无血清冻存液,液氮储存
倍增时间 ~24-30小时

?二、细胞接收后的处理

1)?收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于室温放置约1h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2)?请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

3)?贴壁细胞:细胞在室温中放置1h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4)?细胞运输途中脱落操作方法:把脱落的细胞收集离心后弃上清,用PBS清洗一遍,离心弃上清,在离心管中加入1ml胰酶吹散消化20秒左右,加完全培养基终止消化后离心重新铺平,剩下的贴壁细胞就按照正常贴壁细胞传代方法操作。

5)?备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。??收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。?

三、细胞培养操作

1)?复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主将含有1 mL细胞悬液的冻存管在?37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达?80%-90%,即可进行传代培养。

a)?弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。??????????

b)?加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。

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