Human CBS(Cystathionine beta-synthase) ELISA Kit
人CBS(Cystathionineβ-合成酶)ELISA试剂盒
检测原理:
博研因赛生物生产的ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗人CBS抗体包被于酶标板上,标本和标准品中的人CBS与抗体结合,加入生物素化的抗人CBS抗体,再加入ABC复合物与生物素抗体结合,形成免疫复合物,然后加入TMB显色底物,显色剂显蓝色, 加终止液变黄色,游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值,人CBS浓度与OD值之间呈正比,可通过绘制标准曲线计算出标本中CBS的浓度。
检测范围:1.56-100ng/ml
灵敏度:0.938ng/ml
别名:CBS/Cystathionine beta-synthase/Beta-thionase/Serine sulfhydrase/HIP4
标本收集与试剂准备:
1、血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆避免使用溶血,***标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明。待测样本应尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。
2、洗涤液配置:用蒸馏水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水)
3、标准品配制:取7个1.5ml离心管,分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank。从 至七管中分别加入标准品/样品稀释液300ul。在 管中加入标准品溶液300ul(标准品浓度),置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出300ul,移至 管。如此反复作对倍稀释,从第六管中吸出300ul弃去,第七管为空白对照。(建议标准曲线使用以下浓度: 1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank)。
4、生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟,用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液,根据所需用量配置,当日使用,剩余弃之。
5、ABC复合物工作液配置:使用前20分钟,用ABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液,当日使用,剩余弃之。
6、如果您的样本中检测物浓度高于标准品 值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。

检测程序:

1.准备与加样：将试剂盒从冷藏环境取出平衡至室温34。设置标准品孔和样本孔，分别加入不同浓度的标准品或待测样本（通常为50-100μL/孔）。2.温育：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，封板后于37℃恒温箱中温育60-90分钟。3.洗板：弃去孔内液体，使用洗涤液洗板5次并拍干，以去除未结合的物质。

4.显色：加入TMB底物显色液，37℃避光孵育15分钟左右。

5.终止与读数：加入终止液终止反应，溶液由蓝变黄。在15分钟内使用酶标仪于450 nm波长处测定各孔的OD值。

6.结果计算：根据标准品的OD值和浓度绘制标准曲线，代入样本OD值计算出对应的CBS浓度3。

注意事项
温度控制：所有试剂和样本必须恢复至室温（20-25℃），否则会导致OD值偏低，影响结果准确性。
避免干燥：洗板过程中，严禁板孔干燥，否则会导致标准曲线线性差、重复性不好。拍干后应立即进行下一步操作。
充分混匀：每次加样和加试剂后都需充分混匀，否则重复性会变差。
精准操作：建议使用 的移液器，并为每个标准品和样品更换吸头，避免交叉污染。
避光操作：显色液对光敏感，显色过程需避光。
试剂有效期：不要使用过期试剂盒，不同批号的试剂不得混用。
安全防护：终止液为2M硫酸，具有腐蚀性；显色液可能对皮肤和 呼  吸 道 有刺激。操作时请佩戴手套、口罩和防护眼镜，避免接触皮肤和衣物。
样品稀释：若样品OD值高于标准曲线上限（即浓度过高），需用样品稀释液适当稀释后重测，计算时乘以相应的稀释倍数。
方法选择：请务必根据您所购试剂盒的说明书确认是“竞争法”还是“夹心法”，因为两者的标准曲线趋势（负相关 vs 正相关）和计算方式完全不同。以上步骤主要基于更常见的竞争法。

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