人CCK-8(胆囊收缩素8)ELISA试剂盒

博研因赛生物生产的ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗人CCK-8抗体包被于酶标板上,标本和标准品中的人CCK-8与抗体结合,加入生物素化的抗人CCK-8抗体,再加入ABC复合物与生物素抗体结合,形成免疫复合物,然后加入TMB显色底物,显色剂显蓝色,最 后加终止液变黄色,游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值,人CCK-8浓度与OD值之间呈正比,可通过绘制标准曲线计算出标本中CCK-8的浓度。
检测范围:15.625-1000pg/ml
灵敏度:9.375pg/ml
别名:CCK-8产品组成
组分:
核心试剂:
预包被酶标板:1块(12条×8孔),孔内已包被NP-OVA偶联抗原。
壬基酚标准品:6瓶(1ml/瓶),通常为一系列浓度的溶液,如0 ppb, 0.5 ppb, 1.5 ppb, 4.5 ppb, 13.5 ppb, 40.5 ppb(具体浓度因厂家而异)。
抗体工作液:1瓶(5.5-6ml),特异性抗壬基酚抗体(可能为浓缩液,需稀释)。
酶标记物:1瓶(6-11ml),通常为HRP标记的二抗。
显色液:A液和B液各1瓶(各6ml),混合后为TMB底物。
终止液:1瓶(6ml),通常为2M硫酸溶液。
浓缩洗涤液:1瓶(40ml),通常为20倍浓缩,需稀释后使用。
样本复溶液/稀释液:1瓶(50ml),用于稀释样品和标准品。                                        间接竞争ELISA法（最常用）：
固相包被：微孔板的孔壁上预包被了双酚A与载体蛋白（如卵清白蛋白OVA）偶联而成的包被抗原。
竞争性结合：检测时，向微孔中加入标准品或待测样品，并同时加入特异性的抗双酚A抗体。此时，样品中游离的双酚A与微孔板上预包被的包被抗原会竞争结合有限数量的抗双酚A抗体。
信号产生：孵育并洗涤后，加入酶标记物（通常是辣根过氧化物酶HRP标记的二抗，即抗抗体）。该酶标二抗会与已结合在板上的抗体（未被样品中双酚A占据的抗体）结合。再次孵育并洗涤后，加入TMB（四甲基联苯胺）底物溶液。
显色与检测：在酶的催化下，TMB底物显色（通常为蓝色）。样品中双酚A的浓度越高，与包被抗原竞争结合抗体的能力就越强，最终留在板上与酶标二抗结合的抗体就越少，显色后的颜色就越浅。
定量关系：加入终止液（通常为稀硫酸）终止反应，溶液由蓝色变为黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）。样品的吸光度值与其所含的双酚A的含量成负相关。通过与一系列已知浓度的标准品比较，绘制标准曲线，即可计算出样品中双酚A的含量。
注意事项
温度控制：所有试剂和样本必须恢复至室温（20-25℃），否则会导致OD值偏低，影响结果准确性。
避免干燥：洗板过程中，严禁板孔干燥，否则会导致标准曲线线性差、重复性不好。拍干后应立即进行下一步操作。
充分混匀：每次加样和加试剂后都需充分混匀，否则重复性会变差。
精准操作：建议使用 的移液器，并为每个标准品和样品更换吸头，避免交叉污染。
避光操作：显色液对光敏感，显色过程需避光。
试剂有效期：不要使用过期试剂盒，不同批号的试剂不得混用。
安全防护：终止液为2M硫酸，具有腐蚀性；显色液可能对皮肤和 呼  吸 道 有刺激。操作时请佩戴手套、口罩和防护眼镜，避免接触皮肤和衣物。
样品稀释：若样品OD值高于标准曲线上限（即浓度过高），需用样品稀释液适当稀释后重测，计算时乘以相应的稀释倍数。
方法选择：请务必根据您所购试剂盒的说明书确认是“竞争法”还是“夹心法”，因为两者的标准曲线趋势（负相关 vs 正相关）和计算方式完全不同。以上步骤主要基于更常见的竞争法。

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