Human CD40L(Cluster of Differentiation 40 Ligand) ELISA Kit
人CD40L(分化簇40配体)ELISA试剂盒
检测原理:
博研因赛生物生产的ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗人CD40L抗体包被于酶标板上,标本和标准品中的人CD40L与抗体结合,加入生物素化的抗人CD40L抗体,再加入ABC复合物与生物素抗体结合,形成免疫复合物,然后加入TMB显色底物,显色剂显蓝色,最 后加终止液变黄色,游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值,人CD40L浓度与OD值之间呈正比,可通过绘制标准曲线计算出标本中CD40L的浓度。
检测范围:62.5-22800pg/ml
灵敏度:37.5pg/ml
别名:CD40L/TNFSF5/TNFSF5,CD40LG/CD154/HIGM1/IGM/IMD3/T-BAM/TRAP/Gp39
标本收集与试剂准备:
1、血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆避免使用溶血,***标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明。待测样本应尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。
2、洗涤液配置:用蒸馏水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水)
3、标准品配制:取7个1.5ml离心管,分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank。从第 一至七管中分别加入标准品/样品稀释液300ul。在第 一管中加入标准品溶液300ul(标准品浓度),置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出300ul,移至第 二管。如此反复作对倍稀释,从第六管中吸出300ul弃去,第七管为空白对照。(建议标准曲线使用以下浓度: 1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank)。
4、生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟,用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液,根据所需用量配置,当日使用,剩余弃之。
5、ABC复合物工作液配置:使用前20分钟,用ABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液,当日使用,剩余弃之。
6、如果您的样本中检测物浓度高于标准品最 高值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。
检测程序:
1、微孔板使用前洗板2次,向滤纸印干后,请立即使用。
2、加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板混匀后置37℃,90分钟,然后甩去酶标板内液体,向滤纸上印干,不洗板。
3、每孔加入1×的生物素化抗体工作液100ul,混匀后置37℃,60分钟。
4、洗板:用洗涤液将微孔板充分洗涤3次,向滤纸上印干。
5、每孔加入1×的ABC复合物工作液100ul,混匀后置37℃,30分钟。
6、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤5次,向滤纸上印干。
7、每孔加入底物工作液90ul,混匀后置37?℃暗处反应3-20分钟(具体显色时间根据显色结果而定)。
8、每孔加入50ul终止液,混匀,30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
注意事项
温度控制：所有试剂和样本必须恢复至室温（20-25℃），否则会导致OD值偏低，影响结果准确性。
避免干燥：洗板过程中，严禁板孔干燥，否则会导致标准曲线线性差、重复性不好。拍干后应立即进行下一步操作。
充分混匀：每次加样和加试剂后都需充分混匀，否则重复性会变差。
精准操作：建议使用 的移液器，并为每个标准品和样品更换吸头，避免交叉污染。
避光操作：显色液对光敏感，显色过程需避光。
试剂有效期：不要使用过期试剂盒，不同批号的试剂不得混用。
安全防护：终止液为2M硫酸，具有腐蚀性；显色液可能对皮肤和 呼  吸 道 有刺激。操作时请佩戴手套、口罩和防护眼镜，避免接触皮肤和衣物。
样品稀释：若样品OD值高于标准曲线上限（即浓度过高），需用样品稀释液适当稀释后重测，计算时乘以相应的稀释倍数。
方法选择：请务必根据您所购试剂盒的说明书确认是“竞争法”还是“夹心法”，因为两者的标准曲线趋势（负相关 vs 正相关）和计算方式完全不同。以上步骤主要基于更常见的竞争法。


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