Human CLPB/HSP78(Caseinolytic peptidase B protein homolog) ELISA Kit

人CLPB/HSP78(酪蛋白水解肽酶B蛋白同源物)ELISA试剂盒
别名:Suppressor of potassium transport defect 3/SKD3
  相关抗体试剂信息
在科研试剂中，已有针对人CLPB/HSP78的抗体产品。其免疫原为针对人CLPB N端区域的合成肽段，适用于Western Blotting等实验。此外，还有FITC标记的兔多克隆Anti-CLPB抗体，其抗原表位位于人CLPB的C端区域（氨基酸673-702），经验证可适用于ELISA和Western Blotting实验。

• 试剂平衡：试剂盒应保存在2-8℃，使用前需提前取出在室温下平衡约20分钟。若洗涤液原液有结晶，需水浴加热使其完全溶解后再稀释使用。
• 样本制备：适用于ELISA测定的样本包括血清、血浆、细胞上清液、组织匀浆等。血清或血浆样本通常需在3000转离心10-30分钟后取上清。若样本不能及时检测，应按一次用量分装后冻存于-20℃，避免反复冻融。
• 板条保存：从铝箔袋中取出所需板条后，剩余板条应立即用自封袋密封并放回4℃保存，以保持干燥。

1. 加样：设置标准品孔和样本孔。标准品孔加入不同浓度的标准品（如50μL）；样本孔先加入待测样本（如10μL），再加样本稀释液（如40μL）；空白孔不加任何液体。加样时务必将液体加在板孔底部，避免溅出或产生气泡。
2. 一抗孵育：除空白孔外，向标准品孔和样本孔中加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体（如100μL）。用封板膜封住反应孔，置于37℃水浴锅或恒温箱中温育60分钟。
3. 洗涤：弃去孔内液体，加入洗涤液浸泡约30秒至2分钟后倒掉，重复洗涤3-5次。 在吸水纸上拍干孔板，去除残余液体。
4. 显色：每孔加入新鲜配制的底物溶液（如底物A、B各50μL或TMB 100μL），37℃避光孵育15-30分钟。此时孔内液体会呈现梯度蓝色。
5. 终止反应：每孔加入终止液（如50-100μL），酶反应终止后孔内液体颜色将由蓝变黄。

• OD值检测：在加入终止液后30分钟内，使用酶标仪在特定波长（通常为450nm）下测定各孔的吸光度（OD值）。
• 浓度计算：将标准品的浓度作为横坐标（X轴），对应的OD值作为纵坐标（Y轴），在Excel或GraphPad中绘制标准曲线并拟合出公式。将样本的OD值代入公式计算出稀释液的浓度， 乘以相应的稀释倍数，即可得到样本的实际浓度。

 四、注意事项:

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5、仅用于科研,不能用于临床诊断!

关键字: CLPB/HSP78;酪蛋白水解肽酶B蛋白同源物;CLPB/HSP78 ELISA Kit;人CLPB/HSP78 ELISA试剂盒;