Human CLL1(Collectin Liver 1) ELISA Kit

人CLL1(Collectin肝1)ELISA试剂盒

检测范围:0.156-10ng/ml

灵敏度:0.094ng/ml

别名:CLL1/Collectin liver protein 1/CL-L1/Collectin-10/Colec10?

一、 试剂盒核心参数与原理

• 检测原理：采用双抗体夹心法。将CLL1抗体包被于96孔微孔板中，样本中的CLL1与固相抗体结合后，加入生物素化抗体及HRP标记的亲和素， 通过TMB底物显色。颜色的深浅与样本中CLL1浓度呈正相关，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）。
• 检测范围与灵敏度：主流试剂盒的检测范围通常在1.56-100 ng/mL之间，最小可检测剂量（灵敏度）一般小于等于0.59 ng/mL。
• 适用样本：血清、血浆（EDTA或肝素抗凝）、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清及其他生物液体。
• 精密度与回收率：批内变异系数（CV）通常小于10%，批间CV小于12%；血清及血浆样本的平均加标回收率约在85%-91%之间。

二、 实验前准备与样本处理

1. 试剂平衡：试剂盒应保存在2-8℃，切勿冷冻。实验前需提前20分钟将所需试剂从冰箱取出，在室温（20-25℃）下平衡。若浓缩洗涤液有结晶，需水浴加热使其完全溶解后再稀释使用。
2. 样本制备：
   • 血清/血浆：采集血液后，在30分钟内于2-8℃、1000×g离心15分钟取上清。避免标本溶血，红细胞裂解会影响最终检测结果。
   • 组织匀浆：用预冷PBS冲洗组织去除残留血液，按1:9的重量体积比加入含蛋白酶抑制剂的PBS，在冰上充分研磨。匀浆液经5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
   • 保存原则：样本若不及时检测，应按一次用量分装，冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

三、 核心实验操作步骤（双抗体夹心法）

1. 加样与孵育：设置标准品孔和样本孔。标准品孔加入不同浓度的标准品（如100μL），样本孔加入待测样本（如100μL）。用封板膜封住反应孔，置于37℃恒温箱温育1小时。
2. 加检测液A：弃去孔内液体并拍干，每孔加入检测溶液A（如100μL），37℃温育1小时。
3. 洗板：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩去，在吸水纸上拍干，重复洗板3次。
4. 加检测液B：每孔加入检测溶液B（如100μL），37℃温育30分钟。
5. 再次洗板：重复洗板操作5次，确保 洗去未结合的物质。
6. 显色：每孔加入TMB底物（如90μL），37℃避光孵育10-20分钟，孔内液体呈梯度蓝色。
7. 终止与读数：每孔加入终止液（如50μL），液体由蓝变黄。立即在450nm波长下测定各孔OD值。

四、注意事项

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5、仅用于科研,不能用于临床诊断!

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