人CKLFSF6(趋化因子样因子超家族6)ELISA试剂盒

Human CKLFSF6(Chemokine Like Factor Superfamily 6) ELISA Kit

检测范围:0.156-10ng/ml

灵敏度:0.094ng/ml

别名:CKLFSF6/CKLF-like MARVEL transmembrane domain-containing protein 6/CMTM6

一、 试剂盒核心参数与原理

• 检测原理：采用双抗体夹心法。将CKLFSF6特异性抗体包被于96孔微孔板中，样本中的CKLFSF6与固相抗体结合后，加入生物素化抗体及HRP标记的亲和素， 通过TMB底物显色。颜色的深浅与样本中CKLFSF6浓度呈正相关，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）。
• 适用样本：血清、血浆（EDTA或肝素抗凝）、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清及其他生物液体。
• 保存条件：试剂盒通常需保存在2-8℃。

二、 实验前准备与样本处理

1. 试剂平衡：实验开始前，需将试剂盒从2-8℃冰箱取出，在室温（18-25℃）下平衡至少30分钟。若浓缩洗涤液有结晶析出，可在水浴中加温助溶，待结晶完全溶解后再进行稀释配制。
2. 样本制备：
   • 血清：用干净试管收集血液，室温静置凝固30分钟，2000×g离心20分钟，收集上清液立即测试或分装冻存。
   • 血浆：采用肝素或EDTA抗凝，抽血后30分钟内在2-8℃、2000×g离心20分钟。为消除血小板影响，建议进一步在10000×g离心10分钟，取上清备用。
   • 细胞培养上清：离心去除沉淀，立即分析或分装后于-20℃冷冻保存。
   • 贴壁/悬浮细胞：去除培养液后用PBS清洗，加入适量裂解液充分裂解细胞，经10000-14000g离心3-5分钟后取上清。
   • 保存原则：样本若不及时检测，需按一次用量分装，冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

三、 核心实验操作步骤（双抗体夹心法）

1. 加样与孵育：分别设置标准品孔和待测样本孔，每孔加入标准品或待测样本100μL，轻轻晃动混匀。覆上板贴，置于37℃恒温箱温育2小时。
2. 加生物素标记抗体：弃去孔内液体并甩干（此步不用洗涤）。每孔加入100μL生物素标记抗体工作液，覆上新的板贴，37℃温育1小时。
3. 洗板：弃去孔内液体，甩干，进行洗板3次。每次加入200μL洗涤液浸泡2分钟，倒掉后在吸水纸上拍干去除残留液体。
4. 加酶结合物与孵育：加入HRP标记亲和素工作液，37℃温育30分钟（需避光）。随后再次洗板3次。
5. 显色与终止：每孔加入100μL底物溶液（如TMB），37℃避光孵育30分钟，液体呈梯度蓝色。 每孔加入100μL终止液（如2M硫酸），反应终止后孔内液体呈橙黄色。

四、 结果读取与数据分析

1. 酶标仪读数：试验结果判定必须以酶标仪读数为准。使用双波长检测时，波长应设置为450nm和630nm。需在终止反应后30分钟内完成检测。
2. 浓度计算：以标准品浓度为横坐标（X轴），对应的OD值为纵坐标（Y轴），在软件中绘制标准曲线并拟合出公式。将样本的OD值代入公式计算出稀释液浓度， 乘以相应的稀释倍数，得出样本中CKLFSF6的实际浓度。

五、注意事项:

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5、仅用于科研,不能用于临床诊断!

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