Human CKM(Creatine kinase M-type) ELISA Kit

人CKM(肌酸激酶M型)ELISA试剂盒

别名:CKM/CKMM/M-CK/creatine kinase M-type/Creatine kinase M chain/creatine kinase, muscle/creatine kinase-M

检测范围:1.563-100ng/ml
灵敏度:0.938ng/ml

试剂盒核心参数与原理

• 检测原理：采用双抗体夹心法。微孔板预包被抗人CK-MB抗体，样本中的CK-MB与固相抗体结合后，加入HRP标记的抗人CK-MB抗体，形成复合物。洗涤后加入底物（TMB）显色，颜色深浅与CK-MB浓度呈正相关。
• 检测范围：常见范围在 3.125 ng/mL – 100 ng/mL 之间，灵敏度通常小于 0.1 ng/mL。
• 适用样本：血清、血浆（EDTA或肝素抗凝）、细胞培养上清液及组织匀浆。
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实验前准备与样本处理

1. 试剂平衡：试剂盒需保存在2-8℃。使用前必须提前30分钟将所有试剂和标本平衡至室温（18-25℃），严禁直接在37℃溶解试剂。
2. 样本制备：
   • 血清：全血室温放置2小时或4℃过夜凝固，1000×g离心20分钟，取上清。
   • 血浆：使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内于2-8℃、1000×g离心15分钟，取上清。
   • 组织匀浆：用预冷PBS冲洗组织，按重量体积比（1g:9ml）加入PBS，冰上匀浆后离心取上清。
3. 关键禁忌：标本必须避免溶血。红细胞中含有丰富的腺苷酸激酶（AK）和肌激酶，溶血会释放这些物质，导致CK-MB检测结果假性偏高。

核心实验操作步骤（双抗体夹心法）

1. 加样：设置空白孔、标准品孔和待测样本孔。样本孔中先加样本稀释液（如40μL），再加待测样本（如10μL），确保最终稀释倍数符合要求（如5倍）。
2. 一抗孵育：覆上封板膜，37℃温育30分钟至1小时（具体时间视品牌而定）。
3. 加酶标抗体：弃去孔内液体，每孔加入酶标抗体工作液（如50-100μL），空白孔除外。覆上新膜，37℃温育30分钟至1小时。
4. 洗板：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干。每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次， 在吸水纸上拍干。
5. 显色：每孔依次加入底物A和底物B（如各50μL），轻轻震荡混匀，37℃避光显色10-20分钟。
6. 终止与读数：每孔加入终止液（如50μL），液体由蓝变黄。立即在450nm波长下测定OD值。

结果判断与计算:

1、所有OD值建议减除空白值后再行计算,如空白OD低于0.1,也可以直接计算。

2、以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘上稀释倍数即可。

注意事项:

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5、仅用于科研,不能用于临床诊断!

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