一、 试剂盒核心参数与原理

• 检测原理：采用双抗体夹心法。微孔板预包被抗人CKMT1A抗体，样本中的CKMT1A与固相抗体结合后，加入生物素化抗体及HRP标记的亲和素， 通过TMB底物显色。颜色的深浅与样本中CKMT1A浓度呈正相关，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）。
• 检测范围与灵敏度：常见检测范围在 1.56-100 ng/mL 之间，灵敏度（最小可检测剂量）通常小于等于 0.61 ng/mL。
• 适用样本：血清、血浆（EDTA、肝素或枸橼酸盐抗凝）、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等。
• 质控指标：批内变异系数（CV）通常小于10%，批间CV小于12%；血清及血浆样本的平均加标回收率约在93%-102%之间。

二、 实验前准备与样本处理

1. 试剂平衡：试剂盒应保存在2-8℃。实验前需提前20-30分钟将所有试剂和标本平衡至室温（18-25℃）。若浓缩洗涤液有结晶析出，需水浴加热使其完全溶解后再进行稀释。
2. 样本制备：
   • 血清：使用无热原试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，1000-3000 rpm离心10分钟，收集上清。
   • 血浆：使用EDTA、肝素或枸橼酸盐抗凝，采集后1000-3000 rpm离心10分钟，取上清。
   • 组织匀浆：切取组织块在PBS中过洗，按1g组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例在冰水中匀浆，5000-10000 rpm离心10分钟取上清。
   • 保存原则：样本若不及时检测，需按一次用量分装，冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

三、 核心实验操作步骤（双抗体夹心法）

1. 加样与孵育：设置空白孔、标准品孔和待测样本孔。每孔加入标准品或待测样本100μL，轻轻晃动混匀。覆上封板膜，置于37℃恒温箱温育90分钟。
2. 加生物素标记抗体：弃去孔内液体，洗板2次。每孔加入100μL生物素标记抗体工作液，覆上新膜，37℃温育60分钟。
3. 洗板：弃去孔内液体，洗板3次。
4. 加酶结合物：除空白孔外，每孔加入100μL酶结合物工作液，37℃避光温育30分钟。随后弃去液体，洗板5次。
5. 显色与终止：每孔加入100μL TMB底物溶液，37℃避光孵育，当标准曲线高浓度孔出现明显颜色梯度时即可终止（不超过30分钟）。 每孔加入100μL终止液，液体由蓝变黄。

四、 结果读取与数据分析

1. 酶标仪读数：加入终止液混匀后，需在10分钟内使用酶标仪在450nm波长下测定各孔OD值。
2. 浓度计算：以标准品浓度为横坐标，对应的OD值为纵坐标绘制标准曲线。将样本OD值代入公式计算出稀释液浓度， 乘以相应的稀释倍数，得出样本中CKMT1A的实际浓度。