Human CKLF(Chemokine Like Factor) ELISA Kit

人CKLF(趋化因子)ELISA试剂盒

检测范围:125-8000pg/ml

灵敏度:75pg/ml

别名:CKLF/C32/UCK-1

一、 试剂盒核心参数与原理

• 检测原理：主流试剂盒采用双抗体夹心法。微孔板预包被抗人CKLF抗体，样本中的CKLF与固相抗体结合后，加入生物素化抗体及HRP标记的亲和素， 通过TMB底物显色。颜色的深浅与样本中CKLF浓度呈正相关，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）。
• 检测范围与灵敏度：检测范围因品牌而异，常见范围如 100-2500 pg/mL，灵敏度（最小可检测剂量）通常可达 1.0 pg/mL。
• 适用样本：血清、血浆（EDTA、肝素或枸橼酸盐抗凝）、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清及体液等。
• 质控指标：批内变异系数（CV）通常小于10%，批间CV小于12%；血清及血浆样本的平均加标回收率约在80%- 之间。

二、 实验前准备与样本处理

1. 1、试剂平衡：试剂盒应保存在2-8℃。实验前需提前20-30分钟将所有试剂和标本平衡至室温（18-25℃）。若浓缩洗涤液有结晶析出，需水浴加热使其完全溶解后再进行稀释。
2. 样本制备：
   • 血清：使用无热原试管收集血液，室温自然凝固10-20分钟，2000-3000 rpm离心20分钟，收集上清。
   • 血浆：使用EDTA或柠檬酸钠抗凝，混合10-20分钟后，2000-3000 rpm离心20分钟，取上清。
   • 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水或PBS捣碎匀浆，3000 rpm离心10分钟，取上清。
   • 保存原则：样本若不及时检测，需按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融。

三、 核心实验操作步骤（双抗体夹心法）

1. 加样与孵育：设置空白孔、标准品孔和待测样本孔。标准品孔加入不同浓度标准品（如50μL）；样本孔先加样本稀释液（如40μL），再加待测样本（如10μL，终稀释度为5倍）。覆上封板膜，置于37℃恒温箱温育30-60分钟。
2. 加生物素标记抗体：弃去孔内液体并拍干，每孔加入生物素标记抗体工作液（如50-100μL）。覆上新膜，37℃避光温育30-60分钟。
3. 洗板：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置30秒至1分钟后甩去，重复洗涤3-5次，在吸水纸上拍干。
4. 加酶结合物：每孔加入HRP标记亲和素工作液（如80-100μL），37℃避光温育30分钟。再次洗板3-5次并拍干。
5. 显色与终止：每孔依次加入底物A和底物B（如各50μL），轻轻震荡混匀，37℃避光显色10-15分钟。 每孔加入终止液（如50μL），液体由蓝变黄。

结果判断与计算:

1、所有OD值建议减除空白值后再行计算,如空白OD低于0.1,也可以直接计算。

2、以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘上稀释倍数即可。

注意事项:

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5、仅用于科研,不能用于临床诊断!

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