Human CLDN5(Claudin 5) ELISA Kit

人CLDN5(Claudin5)ELISA试剂盒

检测范围:0.156-10ng/ml

灵敏度:0.094ng/ml

别名:CLDN5/AWAL/BEC1/CLDN5/CPETRL1/TMDVCF/TMVCF1/AWALTransmembrane protein deleted in VCFS/BEC1/claudin 5/claudin-5/CPETRL1/TMVCFTMDVCF/transmembrane protein deleted in velocardiofacial syndrome

采用经典的双抗体夹心法。微孔板预包被了特异性抗人CLDN5抗体，依次加入样本、HRP标记的检测抗体（或生物素化抗体及HRP标记的亲和素/SABC复合物），形成复合物后加入TMB底物显色。颜色深浅与样本中CLDN5浓度呈正相关。

适用样本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝）、组织匀浆、细胞裂解物、细胞培养上清及其他生物体液。

标准操作流程

1. 试剂平衡与准备：试剂盒从2-8℃冷藏取出后，需在室温（20-25℃）平衡20-30分钟。将浓缩洗涤液按比例（如1:20）用蒸馏水稀释，并按需配制生物素化抗体工作液或混合TMB显色液。
2. 加样温育：
   • 设置空白孔、标准品孔与样本孔，精准加入50-100μL样本或标准品。
   • 加入HRP标记的检测抗体（或生物素化抗体），用封板膜封孔，37℃恒温孵育结合反应（通常为30-60分钟）。
3. 洗涤与显色：
   • 弃去液体，使用洗涤缓冲液洗板4-5次，吸水纸拍干， 去除未结合杂质。
   • 加入TMB底物液，37℃避光孵育10-20分钟，密切观察颜色变化，待梯度蓝色清晰显现。
4. 终止与读数：加入终止液（颜色由蓝转黄），混匀后即刻（通常在15-30分钟内）使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，并根据标准曲线计算浓度。

操作步骤

1. 准备与平衡：试剂盒从2-8℃冷藏环境取出后，需在室温（20-25℃）平衡15-30分钟。未用完的板条应密封放回冷藏保存。
2. 加样与孵育：设置标准品孔、空白孔和待测样本孔。加入标准品或处理好的样本（如50μL或100μL），用封板膜封住，37℃恒温箱温育（通常为30-60分钟）。
3. 洗板：弃去孔内液体，在吸水纸上拍干。每孔加满洗涤液（约350μL），静置1分钟后甩去并拍干，重复洗涤3-5次。
4. 加检测试剂：依次加入生物素化抗体及酶标亲和素（或SABC复合物），37℃孵育并严格洗板。
5. 显色：每孔加入TMB底物（约90-100μL），37℃避光孵育10-20分钟。
6. 终止与读数：加入终止液（约50-100μL）终止反应（孔内液体由蓝变黄）。立即在15-30分钟内使用酶标仪于450 nm波长处测定OD值。

结果判断与计算:

1、所有OD值建议减除空白值后再行计算,如空白OD低于0.1,也可以直接计算。

2、以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘上稀释倍数即可。

注意事项:

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5、仅用于科研,不能用于临床诊断!

关键字: CLDN5;Claudin5;CLDN5 ELISA Kit;人CLDN5 ELISA试剂盒;