Human CK 18-M30(Cytokeratin 18-M30) ELISA Kit

人CK18-M30(细胞角蛋白18-M30)ELISA试剂盒

检测范围:15.625-1000mIU/ml

灵敏度:9.375mIU/ml

试剂盒主要组分

• 微孔酶标板（如12孔×8条的96T配置，或12孔×4条的48T配置）
• 标准品（用于绘制标准曲线，常见浓度梯度如800、400、200、100、50、25 ng/mL）
• 样本稀释液
• 检测抗体-HRP
• 20×浓缩洗涤缓冲液（使用前需按1:19比例用蒸馏水稀释）
• TMB显色底物（底物A、底物B）及终止液
• 封板膜、自封袋与说明书

三、适用样本类型及处理

• 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可。
• 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，在采集后30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清。
• 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重剪碎。按1:9的重量体积比加入PBS（推荐加入蛋白酶抑制剂），于冰上充分研磨或超声破碎。 于5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
• 其他样本：如细胞培养上清、尿液、胸腹水等，无菌管收集后1000×g或2000-3000转/分离心20分钟，仔细收集上清。
• 保存要求：样本应清澈透明，悬浮物应离心去除。若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃或-80℃，严禁反复冻融。标本溶血会影响 检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

四、常规操作步骤

1. 准备与平衡：请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（20-25℃）。未用完的板条应装入密封袋中放回4℃保存。
2. 加样与孵育：设置标准品孔和样本孔。标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。除空白孔外，每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住，37℃恒温箱温育60分钟。
3. 洗板：弃去孔内液体，在吸水纸上拍干。每孔加满洗涤液（约350μL），静置1分钟后甩去并拍干，重复洗涤5次。
4. 显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。
5. 终止与读数：每孔加入终止液50μL终止反应（孔内液体由蓝变黄）。在15分钟内使用酶标仪于450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断与计算:

1、所有OD值建议减除空白值后再行计算,如空白OD低于0.1,也可以直接计算。

2、以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘上稀释倍数即可。

注意事项:

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5、仅用于科研,不能用于临床诊断!

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