人BMP-6(骨形态发生蛋白6)ELISA试剂盒检测原理:
博研因赛生物生产的ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗人BMP-6抗体包被于酶标板上,标本和标准品中的人BMP-6与抗体结合,加入生物素化的抗人BMP-6抗体,再加入ABC复合物与生物素抗体结合,形成免疫复合物,然后加入TMB显色底物,显色剂显蓝色,最 后加终止液变黄色,游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值,人BMP-6浓度与OD值之间呈正比,可通过绘制标准曲线计算出标本中BMP-6的浓度。
检测范围:0.156-10ng/ml
灵敏度:0.094ng/ml
别名:BMP-6/BMP6/VGR/VGR1/Vgr-1/bone morphogenetic protein 6/vegetal related growth factor(TGFB-related)/vegetal-related(TGFB related) cytokine/VG-1-R/VG-1-related protein/Vg1-related sequence
标本收集与试剂准备:
1、血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆避免使用溶血,***标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明。待测样本应尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。
2、洗涤液配置:用蒸馏水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水)
3、标准品配制:取7个1.5ml离心管,分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank。从第 一至七管中分别加入标准品/样品稀释液300ul。在第 一管中加入标准品溶液300ul(标准品浓度),置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出300ul,移至第 二管。如此反复作对倍稀释,从第六管中吸出300ul弃去,第七管为空白对照。(建议标准曲线使用以下浓度: 1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank)。
4、生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟,用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液,根据所需用量配置,当日使用,剩余弃之。
5、ABC复合物工作液配置:使用前20分钟,用ABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液,当日使用,剩余弃之。
6、如果您的样本中检测物浓度高于标准品最 高值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。
检测程序:
1、微孔板使用前洗板2次,向滤纸印干后,请立即使用。
2、加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板混匀后置37℃,90分钟,然后甩去酶标板内液体,向滤纸上印干,不洗板。
3、每孔加入1×的生物素化抗体工作液100ul,混匀后置37℃,60分钟。
4、洗板:用洗涤液将微孔板充分洗涤3次,向滤纸上印干。
5、每孔加入1×的ABC复合物工作液100ul,混匀后置37℃,30分钟。
6、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤5次,向滤纸上印干。
7、每孔加入底物工作液90ul,混匀后置37?℃暗处反应3-20分钟(具体显色时间根据显色结果而定)。
8、每孔加入50ul终止液,混匀,30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
结果判断与计算:
1、所有OD值建议减除空白值后再行计算,如空白OD低于0.1,也可以直接计算。
2、以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘上稀释倍数即可。

仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。

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