Human BPIFA2(BPI fold-containing family A member 2) ELISA Kit
人BPIFA2(BPI折叠家族A成员2)ELISA试剂盒
检测范围:0.156-10ng/ml
灵敏度:0.094ng/ml
别名:BPIFA2/BPI fold-containing family A member 2/C20orf70/SPLUNC2/chromosome 20 open reading frame 70/Parotid secretory protein/PSP/short palate, lung and nasal epithelium carcinoma associated 2/short palate, lung and nasal epithelium carcinoma-associated protein 2
采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）。微孔板上预包被了抗人BPIFA2的特异性捕获抗体，加入样本后，样本中的BPIFA2蛋白与固相抗体结合；洗涤后加入生物素标记的检测抗体，再加入酶标（如HRP标记的链霉亲和素）形成复合物。加入TMB底物显色后，颜色的深浅与样本中BPIFA2的浓度呈正相关，通过酶标仪测定吸光度（OD值）即可计算出样本浓度17。
试剂盒主要组分
包含以下核心组件（具体以说明书为准）：
- 预包被微孔板（如96孔或48孔条带）
- BPIFA2标准品（冻干粉或液体，用于绘制标准曲线）
- 生物素标记检测抗体与酶标亲和素（HRP）
- TMB显色底物及终止液（通常为酸性溶液）
- 样本稀释液与浓缩洗涤液（使用前需按说明用蒸馏水稀释）
- 封板膜与说明书
适用样本类型及处理
- 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，1000×g离心10分钟或2000-3000转/分离心20分钟，仔细收集上清。
- 血浆：推荐使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂，混合后离心取上清。若出现沉淀应再次离心。
- 细胞培养上清：1000×g离心10-20分钟去除细胞碎片和聚合物，取上清检测。
- 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水或预冷PBS捣碎研磨，1000×g离心10分钟，取上清液检测。
- 保存要求：样本应分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融导致蛋白质变性。检测前需在室温下解冻并确保充分混匀。
操作步骤
- 准备与平衡：试剂盒从2-8℃冷藏环境取出后，需在室温（20-25℃）平衡15-30分钟。未用完的板条应密封放回冷藏保存。
- 加样与孵育：设置标准品孔、空白孔和待测样本孔。加入标准品或处理好的样本（如50μL或100μL），用封板膜封住，37℃恒温箱温育（通常为60-90分钟）。
- 洗板：弃去孔内液体，在吸水纸上拍干。每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩去并拍干，重复洗涤3-5次。
- 加检测试剂：依次加入生物素化抗体及酶标亲和素（具体步骤视试剂盒设计而定），37℃孵育并严格洗板。
- 显色：每孔加入TMB底物（约90-100μL），37℃避光孵育10-30分钟。
- 终止与读数：加入终止液（约50-100μL）终止反应（孔内液体由蓝变黄）。立即在15分钟内使用酶标仪于450 nm波长处测定OD值。
五、结果计算
以标准品的浓度（log）为横坐标，对应的OD450值为纵坐标，绘制四参数拟合标准曲线。将样本的OD值代入曲线反推浓度， 乘以实验中的样本稀释倍数，即为样本的实际浓度。
结果判断与计算:
1、所有OD值建议减除空白值后再行计算,如空白OD低于0.1,也可以直接计算。
2、以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘上稀释倍数即可。
注意事项:
1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。
2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。
4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。
5、仅用于科研,不能用于临床诊断!
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