人BTG3(蛋白BTG3)ELISA试剂盒

1、所有OD值建议减除空白值后再行计算,如空白OD低于0.1,也可以直接计算。

2、以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘上稀释倍数即可。

一、 检测原理

二、 试剂盒主要组分

• 预包被微孔板（如96孔或48孔条带）
• BTG3标准品（冻干粉或液体，用于绘制标准曲线）
• 生物素标记检测抗体与酶标亲和素（HRP）
• TMB显色底物及终止液（通常为酸性溶液）
• 样本稀释液与浓缩洗涤液（使用前需按说明用蒸馏水稀释）
• 封板膜与说明书

三、 适用样本类型及处理

• 血清/血浆：离心去除沉淀后取上清。推荐使用EDTA或肝素抗凝血浆，避免使用严重溶血或高血脂的样本。
• 细胞培养上清：1000×g离心20分钟去除细胞碎片，取上清检测。
• 组织裂解液/匀浆：用预冷PBS冲洗组织并称重剪碎，加入适量PBS充分研磨或超声破碎，离心后取上清。
• 保存要求：样本应分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。检测前需在室温下解冻并确保充分混匀。

四、 常规操作步骤

1. 准备与平衡：试剂盒从2-8℃冷藏环境取出后，需在室温（20-25℃）平衡15-30分钟。未用完的板条应密封放回冷藏保存。
2. 加样与孵育：设置标准品孔、空白孔和待测样本孔。加入标准品或处理好的样本（如50μL或100μL），用封板膜封住，37℃恒温箱温育（通常为60分钟）。
3. 洗板：弃去孔内液体，在吸水纸上拍干。每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩去并拍干，重复洗涤3-5次。
4. 加检测试剂：依次加入生物素化抗体及酶标亲和素（具体步骤视试剂盒设计而定），37℃孵育并严格洗板。
5. 显色：每孔加入TMB底物（约90μL），37℃避光孵育10-30分钟。
6. 终止与读数：加入终止液终止反应（孔内液体由蓝变黄）。立即在15分钟内使用酶标仪于450 nm波长处测定OD值。

注意事项:
1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。
2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致精 确度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。
4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5、仅用于科研,不能用于临床诊断!

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