Human C3a(Complement Component 3a) ELISA Kit

人C3a(补体成分3a)ELISA试剂盒

检测范围:0.313-20ng/ml

灵敏度:0.188ng/ml

别名:C3a/C3a-desArg/ASP/Anaphylatoxin/C3?

试剂盒主要组分

包含以下核心组件（具体以说明书为准）：

• 微孔酶标板（如96T或48T配置）
• 标准品（冻干粉或液体，用于绘制标准曲线，如1600 pg/ml起始浓度）
• 样本稀释液、检测稀释液A/B
• 检测溶液A/B（含酶标抗体）
• 20×或30×浓缩洗涤缓冲液（使用前需按说明用蒸馏水稀释）
• TMB显色底物（底物A、底物B）及终止液（2N H₂SO₄）
• 封板膜与说明书

三、 适用样本类型及处理

• 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可。
• 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测。
• 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（裂解的红细胞会影响测量结果），称重剪碎。按1:9的重量体积比加入PBS（推荐加入蛋白酶抑制剂），于冰上充分研磨或超声破碎。 于5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
• 细胞培养上清及其他体液：1000×g离心20分钟去除细胞碎片，取上清检测。
• 保存要求：样本应清澈透明，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃或-80℃，严禁反复冻融。标本溶血会影响 检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

四、 常规操作步骤

1. 准备与平衡：请提前从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（20-25℃）。未用完的板条应装入密封袋中放回2-8℃保存。
2. 加样与孵育：设置标准品孔和样本孔。标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。除空白孔外，每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住，37℃恒温箱温育60分钟。
3. 洗板：弃去孔内液体，在吸水纸上拍干。每孔加满洗涤液（约350μL），静置1分钟后甩去并拍干，重复洗涤3-5次。
4. 显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育10-15分钟。
5. 终止与读数：每孔加入终止液50μL终止反应（孔内液体由蓝变黄）。在15分钟内使用酶标仪于450nm波长处测定各孔的OD值。

五、 结果计算

注意事项:

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5、仅用于科研,不能用于临床诊断!

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