Human ALT ELISA Kit(96T)?

?博研因赛生物生产的 ELISA 试剂盒采用“夹心法”:?将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的?靶蛋白,生物素化的检测抗体与靶蛋白结合, SABC?复合物与生物素化检测抗体结合,形成免疫复合物,?加入 TMB 显色液后,若反应孔中有靶蛋白则显蓝色,?加入终止液变黄色,检测过程中游离的成分均被洗去,?用酶标仪在 450 nm 处测 OD 值,靶蛋白浓度与 OD 值?之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白?的浓度。?

试剂盒组分:?(保存温度4℃)??

名?称



规格(48 T)



规格(96T




预包被酶标板



8×6条



8×12条




标准品



1支



1支




标准品/样品稀释液



10ml



15ml




生物素化检测抗体

(100×)



60ul



120ul




生物素化检测抗体稀释液



6ml



12ml




SABC复合物



6ml



12ml




TMB显色液(A/B)



各3ml



各6ml




终止液



6ml



12ml




20×浓缩洗涤液



30ml



60ml




封板胶纸



2张



4张




产品说明书



1份



1份

标本收集与试剂准备:

1.?血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原,无?内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),?血清、血浆避免使用溶血,高 血 脂标本,标本悬?浮物应离心去除,使标本清澈透明。待测样本应?尽早检测,2-8℃保存 48 小时;更长时间须冷冻?(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。?

2.?洗涤液配置:用蒸馏水 1:20 稀释(例:1ml 浓?缩洗涤液加入 19ml 的蒸馏水)?

3.?标准品配制:取 8 个 1.5ml 离心管,分别标注?S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7,blank,第 一管 S1 中加?入标准品/样品稀释液 900ul,第 二至第八管中?分别加入标准品/样品稀释液 200ul,在第 一管?中加入(2000ng/ml)标准品溶液 100ul 置于漩?涡混合器上混匀后用加样器吸出 200ul,移至第?二管,如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出?200ul 弃去,第八管为空白对照。标准曲线浓度?为: 200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 ng/ml?(标准品的用量及标准曲线范围也可根据自己?需要配置)。

?

4.?生物素化抗体工作液配置:使用前 20 分钟,用生?物素化抗体稀释液将?100×生物素化抗体稀释?成?1×工作液,根据所需用量配置,当日使用,?剩余弃之。?

5.?TMB 显色液的配置:使用前 10 分钟,将 TMB 显?色液 A 液和 B 液 1:1 混合,避光放置备用。?6.?如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最?高值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍?数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。?

检测程序:?

1. 加样:空白孔加入 50μl 标准品/样品稀释液,?其余孔各加入标准品或待测样品 50ul,将反应?板混匀后置 37℃,40 分钟。?

2. 洗板:用?1×洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,?每孔加入?1×洗液 350μl,每次震荡/浸泡 1-2?分钟,向滤纸上印干。?

3.?空白孔加入 100ul 生物素化抗体稀释液,其余孔?各加入?1×的生物素化抗体工作液 100ul,混匀?后置 37℃,30 分钟。

4. 洗板:同上。?

5. 每孔加入 SABC 复合物工作液 100ul,混匀后置?37℃,20 分钟。?

6. 洗板:同上。?

7. 每孔加入提前配置好的 TMB 混合液 100ul,混匀?后置 37 ℃暗处反应 10-20 分钟(具体显色时间?根据显色结果而定)。?

8. 每孔加入 100ul 终止液,混匀,30 分钟内用酶?标仪在 450nm 处测吸光值。?

结果判断与计算:?

1.?所有 OD 值建议减除空白孔值后再进行计算,如?空白孔 OD 低于 0.1,也可以直接计算。?

2.?以标准品浓度作横坐标,OD 值作纵坐标,手工?绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品 OD 值计?算出相应含量,再乘以稀释倍数即可。?

试剂盒性能:?

1、?灵敏度:可测浓度小于 1.2ng/ml。?

2、?特异性:同时可检测重组或天然的人 ALT,不与人?其它细胞因子有交叉反应。?

3、?重复性:板内,板间变异系数均小于 10%。、

注意事项:?

1.?在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,?每次检测都应做标准曲线。?

2.?洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 精 确 度误差?及 OD 值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤?液可能有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶?完全溶解后再配制洗涤液。?

3.?检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩?余板条需封好,放回袋中?1?个月内用完。?

4.?试剂盒使用超敏 TMB 溶液,显色过深时会出现沉?淀状,属正常现象,混匀即可,不影响结果判读。?

5.?说明书以试剂盒内纸质版为准,本试剂盒仅用于?科研,不能用于临床诊断!

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