检测原理:

博研因赛生物生产的ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗小鼠T O P 1抗体包被于酶标板上,标本和标准品中的小鼠T O P 1与抗体结合,加入生物素化的抗小鼠T O P 1 抗体,再加入ABC复合物与生物素抗体结合,形成免疫复合物,然后加入TMB显色底物,显色剂显蓝色, 加终止液变黄色,游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值,小鼠T O P 1浓度与OD值之间呈正比,可通过绘制标准曲线计算出标本中T O P 1的浓度。
标本收集与试剂准备:
1、血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆避免使用溶血,高 血 脂 标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明。待测样本应尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。
2、洗涤液配置:用蒸馏水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水)
3、标准品配制:取7个1.5ml离心管,分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank。从一管 至七管中分别加入标准品/样品稀释液300ul。在一管中加入标准品溶液300ul(标准品浓度),置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出300ul,移至二 管。如此反复作对倍稀释,从第六管中吸出300ul弃去,第七管为空白对照。(建议标准曲线使用以下浓度: 1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank)。
4、生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟,用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液,根据所需用量配置,当日使用,剩余弃之。
5、ABC复合物工作液配置:使用前20分钟,用ABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液,当日使用,剩余弃之。
6、如果您的样本中检测物浓度高于标准品 最 高 值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。
注意事项:
1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。
2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。
4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。
5、仅用于科研,不能用于临床诊断!
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治 疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
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