检测原理:

博研因赛生物生产的ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗鸡AT-Ⅲ抗体包被于酶标板上,标本和标准品中的鸡AT-Ⅲ与抗体结合,加入生物素化的抗鸡AT-Ⅲ抗体,再加入ABC复合物与生物素抗体结合,形成免疫复合物,然后加入TMB显色底物,显色剂显蓝色,最 后 加终止液变黄色,游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值,鸡AT-Ⅲ浓度与OD值之间呈正比,可通过绘制标准曲线计算出标本中AT-Ⅲ的浓度。

检测范围:62.5-22800pg/ml

灵敏度:37.5pg/ml

产品组成

试剂盒通常包含以下核心组件（以96孔配置为例）：

标本收集与试剂准备:

1、血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆避免使用溶血，高 血 脂 标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明。待测样本应尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。

2、洗涤液配置:用蒸馏水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水)

3、标准品配制:取7个1.5ml离心管,分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank。从一至七管中分别加入标准品/样品稀释液300ul。在一管中加入标准品溶液300ul(标准品浓度),置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出300ul,移至二管。如此反复作对倍稀释,从第六管中吸出300ul弃去,第七管为空白对照。(建议标准曲线使用以下浓度: 1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank)。

4、生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟,用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液,根据所需用量配置,当日使用,剩余弃之。

5、ABC复合物工作液配置:使用前20分钟,用ABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液,当日使用,剩余弃之。

6、如果您的样本中检测物浓度高于标准品 最 高 值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。

检测程序:

1、微孔板使用前洗板2次,向滤纸印干后,请立即使用。

2、加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板混匀后置37℃,90分钟,然后甩去酶标板内液体,向滤纸上印干,不洗板。

3、每孔加入1×的生物素化抗体工作液100ul,混匀后置37℃,60分钟。

4、洗板:用洗涤液将微孔板充分洗涤3次,向滤纸上印干。

5、每孔加入1×的ABC复合物工作液100ul,混匀后置37℃,30分钟。

6、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤5次,向滤纸上印干。

7、每孔加入底物工作液90ul,混匀后置37?℃暗处反应3-20分钟(具体显色时间根据显色结果而定)。

8、每孔加入50ul终止液,混匀,30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

注意事项:

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键,洗涤不充分将导 致 精 确 度 误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2?个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。

5、仅用于科研,不能用于临床诊断!

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