小鼠总胆固醇ELISA试剂盒

检测原理:

博研因赛生物生产的ELISA试剂盒采用“夹心法”:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的靶蛋白,生物素化的检测抗体与靶蛋白结合, SABC复合物与生物素化检测抗体结合,形成免疫复合物,加入TMB显色液后,若反应孔中有靶蛋白则显蓝色,加入终止液变黄色,检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,靶蛋白浓度与OD值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白的浓度。

试剂盒组分:?(保存温度4℃)

名 ????称


规格(48 T)


规格(96 T)
预包被酶标板

8×6条


8×12条


标准品



1支



1支




标准品/样品稀释液



10ml



15ml

生物素化检测抗体(100×)



60ul



120ul




生物素化检测抗体稀释液



6ml



12ml




SABC复合物



6ml



12ml




TMB显色液(A/B)



各3ml



各6ml




终止液



6ml



12ml




20×浓缩洗涤液?



30ml



60ml




封板胶纸



2张



4张



产品说明书



1份


1份

本试剂盒适用于血清、血浆、组织匀浆及其它生物体液。

标本收集与试剂准备:

1.?血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆避免使用溶血,高血脂标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明。待测样本应尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。

2.?洗涤液配置:用蒸馏水1:20稀释(例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水)

3.?标准品配制:取8个1.5ml离心管,分别标注S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7,blank,第一管S1中加入标准品/样品稀释液900ul,第二至第八管中分别加入标准品/样品稀释液200ul,在第一管中加入(200ng/ml)标准品溶液100ul置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul,移至第二管,如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出200ul弃去,第八管为空白对照。标准曲线浓度为: 20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0 ng/ml(标准品的用量及标准曲线范围也可根据自己需要配置)。

4.?生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟,用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液,根据所需用量配置,当日使用,剩余弃之。

5.?TMB显色液的配置:使用前10分钟,将TMB显色液A液和B液1:1混合,避光放置备用。

6.?如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。

检测程序:

1.?加样:空白孔加入50μl标准品/样品稀释液,其余孔各加入标准品或待测样品50ul,将反应板混匀后置37℃,40分钟。

2.?洗板:用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,每孔加入1×洗液350μl,每次震荡/浸泡1-2分钟,向滤纸上印干。

3.?空白孔加入100ul生物素化抗体稀释液,其余孔各加入1×的生物素化抗体工作液100ul,混匀后置37℃,30分钟。

4.?洗板:同上。

5.?每孔加入SABC复合物工作液100ul,混匀后置37℃,20分钟。

6.?洗板:同上。

7.?每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul,混匀后置37?℃暗处反应10-20分钟(具体显色时间根据显色结果而定)。

8.?每孔加入100ul终止液,混匀,30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果判断与计算:

1.?所有OD值建议减除空白孔值后再进行计算,如空白孔OD低于0.1,也可以直接计算。

2.?以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘以稀释倍数即可。

试剂盒性能:

1、?灵敏度:可测浓度小于0.11ng/ml。

2、?特异性:同时可检测重组或天然的小鼠Cholesterol,不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。

3、?重复性:板内,板间变异系数均小于10%。

注意事项

1.?在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。

2.?洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3.?检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中1?个月内用完。

4.?试剂盒使用超敏TMB溶液,显色过深时会出现沉淀状,属正常现象,混匀即可,不影响结果判读。

5.?说明书以试剂盒内纸质版为准,本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!

仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。

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