NRK细胞(大鼠肾细胞)

一、细胞基本属性
细胞名称
NRK细胞(大鼠肾细胞)
细胞别称
Normal Rat Kidney
商品货号
BC8C0173
种属来源
大鼠
年龄性别
成年
组织来源
肾;正常
生长特性
贴壁生长
细胞形态
上皮细胞样
背景简介
NRK细胞源于Osborne-Mendel大鼠的正常肾组织。

生物安全等级

1

细胞规格

1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测
无
基因表达情况
保藏机构
ATCC; CRL-6509 ECACC; 86032002
培养基
DMEM+10% FBS+1% P/S
培养条件
气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件
无血清冻存液,液氮储存
倍增时间
STR鉴定位点

二、细胞培养操作

1)?复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。

37度水浴摇晃尽快融化细胞,直接在冻存管内将细胞离心。离心转速以离心力150g(约900rpm)左右,1min为宜,弃上清,沉淀用新鲜培养基重悬后接种到10cm培养皿,显微镜下观察细胞并拍照,24h后换液一次。?

2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

1.尽量吸干净T25瓶原培养基;

2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS;

3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层;

4.将培养瓶放入37度培养箱消化;

5.消化到细胞间隙变大,但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化;

6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清;

7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里;

8.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养。?

3)?细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、培养注意事项?

1.?收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象?发生请及时和我们联系。?

2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需?细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由?客户自行承担。?

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度?变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。?

4.?贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm?离心 3 min,弃上?清。加 5?mL?PBS?重悬细胞,再 900 rpm-1000 rpm?离心 3 min,,用新鲜的完全培养基重悬?细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。?

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。?

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通?交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞?的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。?

7. 该细胞仅供科研使用。?

8. 备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 ????收到细胞后 次传代建议 1:2 传代 。?

9. 注意: ?1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。

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