S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）ELISA试剂盒

一、实验原理

SAH ELISA试剂盒主要采用以下两种方法：

1. 酶联免疫竞争法：
   • 纯化的SAH抗体包被微孔板，形成固相载体。
   • 加入样本中的游离SAH与HRP标记的SAH抗原，两者竞争结合固相抗体。
   • 样本中SAH浓度越高，与抗体结合的HRP标记抗原越少。
   • 洗涤后加入底物TMB显色，HRP催化TMB生成蓝色产物，终止反应后转为黄色。
   • 颜色深浅与样本中SAH浓度呈负相关，通过酶标仪测定450nm波长下的吸光度（OD值），结合标准曲线计算浓度。
2. 双抗体夹心法：
   • 纯化的SAH抗体包被微孔板，形成固相抗体。
   • 加入样本中的SAH与HRP标记的SAH抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。
   • 洗涤后加入底物TMB显色，颜色深浅与样本中SAH浓度呈正相关，通过酶标仪测定OD值计算浓度。

二、产品组成

试剂盒通常包含以下核心组件（以96孔配置为例）：

三、操作步骤

以竞争法为例，操作流程如下：

1. 试剂准备：
   • 所有试剂和样本恢复至室温（18-25℃）。
   • 浓缩洗涤液按说明书稀释（如1:25或1:30）。
   • 标准品按梯度稀释（如400 pg/mL→200 pg/mL→…→25 pg/mL）。
2. 加样：
   • 设标准孔、空白孔（不加样本及酶标试剂）和待测样本孔。
   • 标准孔：每孔加入50μL不同浓度的标准品。
   • 样本孔：每孔加入40μL样品稀释液+10μL待测样本（最终稀释度为5倍）。
3. 温育：
   • 用封板膜封板，37℃孵育60分钟。
4. 洗涤：
   • 弃去液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。
5. 加酶：
   • 每孔加入50μL酶标试剂（空白孔除外）。
6. 温育：
   • 操作同步骤3，37℃孵育30-60分钟。
7. 洗涤：
   • 操作同步骤4，洗板5次。
8. 显色：
   • 每孔先加入50μL显色剂A，再加入50μL显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
9. 终止：
   • 每孔加入50μL终止液，蓝色立转黄色。
10. 测定：
    • 15分钟内，用酶标仪在450nm波长下测定各孔OD值。
    • 以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线，计算样本浓度（乘以稀释倍数）。

四、关键注意事项

1. 样本处理：
   • 血清/血浆：离心后取上清，避免溶血。
   • 组织匀浆：按比例加入提取液（如丁醇:甲醇:水=5:25:70），离心后取上清。
   • 避免使用含NaN₃的样本，因其会抑制HRP活性。
2. 操作规范：
   • 洗板需 ，避免残留液体影响结果。
   • 显色时间严格控制（通常10-15分钟），避免颜色过深或过浅。
   • 终止液加入顺序与显色液一致，保证反应同步终止。
3. 结果判定：
   • 若样本OD值高于标准曲线上限，需稀释后重新检测。
   • 所有结果以酶标仪读数为准，避免肉眼判断误差。
4. 储存条件：
   • 未开封试剂盒保存于2-8℃，开封后组分按说明书条件保存。
   • 酶标板开封后未用完，需装入密封袋，2个月内用完。

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