斑马鱼丙二醛（MDA）试剂盒

一、实验原理

斑马鱼丙二醛（MDA）试剂盒基于双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA），具体原理如下：

1. 固相抗体包被：纯化的斑马鱼MDA抗体预先包被于微孔板，形成固相载体。
2. 抗原结合：加入样本或标准品后，MDA与固相抗体特异性结合。
3. 酶标抗体结合：加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的MDA抗体，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
4. 显色反应： 洗涤后，加入底物TMB，HRP催化TMB显蓝色，酸终止后转为黄色。颜色深浅与MDA浓度正相关。
5. 定量分析：酶标仪测定450nm波长下的吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本中MDA浓度。

二、产品组成

试剂盒通常包含以下核心组件（以96孔配置为例）：

三、操作步骤

以双抗体夹心法为例，操作流程如下：

1. 试剂准备
   • 所有试剂和样本恢复至室温（18-25℃）。
   • 浓缩洗涤液按1:20稀释（如30mL浓缩液+570mL蒸馏水）。
   • 标准品稀释：按说明书梯度稀释（如0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 nmol/mL）。
2. 加样与孵育
   • 设置标准品孔、样本孔和空白孔，每孔加入50μL标准品或样本（样本不足时可用稀释液调整）。
   • 除空白孔外，每孔加入100μL酶标试剂，封板膜封板，37℃孵育60分钟。
3. 洗涤
   • 弃去液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩干，重复洗板5次。
4. 显色与终止
   • 每孔加入显色剂A、B各50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10-15分钟。
   • 每孔加入终止液50μL，蓝色立转黄色（15分钟内测定OD值）。
5. 测定与计算
   • 以空白孔调零，450nm波长下测定各孔OD值。
   • 绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，拟合方程（如Y=aX+b）。
   • 计算样本浓度：根据方程或标准曲线查得浓度，乘以稀释倍数即为实际浓度。

四、关键注意事项

1. 样本处理
   • 血清/血浆：3000转/分钟离心10分钟，避免溶血。
   • 组织匀浆：按1:5-10（质量:体积）加入生理盐水，匀浆后离心取上清。
   • 细胞上清：直接检测或离心后取上清。
2. 操作规范
   • 洗板需 ，避免残留液体影响结果。
   • 显色时间严格控制（通常10-15分钟），避免颜色过深或过浅。
   • 终止液加入顺序与显色液一致，保证反应同步终止。
3. 结果判定
   • 若样本OD值高于标准曲线上限，需稀释后重新检测。
   • 避免使用含NaN₃的样本，因其会抑制HRP活性。
4. 储存条件
   • 未开封试剂盒2-8℃保存，避免反复冻融。
   • 酶标板开封后需密封保存，剩余试剂建议1个月内用完。

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