小鼠谷氨酸（Glu）ELISA试剂盒

一、实验原理

小鼠谷氨酸（Glu）ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法，其核心原理如下：

1. 固相抗体包被：纯化的小鼠谷氨酸抗体预包被于微孔板，形成固相载体。
2. 抗原结合：加入样本或标准品后，谷氨酸（Glu）与固相抗体特异性结合。
3. 酶标抗体结合：加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的谷氨酸抗体，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
4. 显色反应：洗涤未结合物质后，加入底物TMB（四甲基联苯胺），HRP催化TMB显蓝色，加入终止液（如硫酸）后变为黄色。
5. 定量分析：颜色深浅与样本中谷氨酸浓度呈正相关，通过酶标仪测定450nm波长处的吸光度（OD值），结合标准曲线计算浓度。

二、产品组成

试剂盒通常包含以下核心组件（以96孔配置为例）：

三、操作步骤

以双抗体夹心法为例，操作流程如下：

1. 试剂准备：
   • 所有试剂和样本恢复至室温（18-25℃）。
   • 浓缩洗涤液按1:30稀释（如20mL浓缩液+580mL蒸馏水）。
   • 标准品稀释：按说明书梯度稀释（如0、1.5、3、6、12、24 mg/L）。
2. 加样与孵育：
   • 设置标准孔、样本孔和空白孔，每孔加入50μL标准品或样本（样本不足时可用稀释液调整）。
   • 每孔加入100μL酶标试剂（空白孔除外），封板膜封板，37℃孵育60分钟。
3. 洗涤：
   • 弃去液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后甩干，重复洗涤5次。
4. 显色与终止：
   • 每孔加入显色剂A、B各50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
   • 每孔加入终止液50μL，蓝色立转黄色。
5. 测定与计算：
   • 以空白孔调零，450nm波长下测定各孔OD值（15分钟内完成）。
   • 以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过回归方程计算样本浓度（需乘以稀释倍数）。

四、关键注意事项

1. 样本处理：
   • 血清/血浆：离心后取上清，避免溶血。
   • 组织匀浆：按1:9（重量:体积）加入PBS，充分匀浆后离心取上清。
   • 细胞培养上清：离心后取上清，避免细胞碎片干扰。
2. 操作规范：
   • 洗板需 ，避免残留液体影响结果。
   • 显色时间严格控制（通常10-15分钟），避免颜色过深或过浅。
   • 终止液加入顺序与显色液一致，保证反应同步终止。
3. 结果判定：
   • 若样本OD值高于标准曲线上限，需稀释后重新检测。
   • 避免使用含NaN₃的样本，因其会抑制HRP活性。
4. 储存条件：
• 未开封试剂盒2-8℃保存，避免反复冻融。
• 酶标板开封后需密封保存，剩余试剂建议1个月内用完。

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