小鼠丙二醛（MDA）ELISA检测试剂盒

一、实验原理

小鼠丙二醛（MDA）ELISA试剂盒主要基于双抗体夹心法或竞争法，通过酶促显色反应定量检测样本中的MDA含量：

1. 双抗体夹心法（主流方法）：
   • 预包被抗MDA抗体的微孔板与样本中的MDA结合，形成固相抗体-抗原复合物。
   • 加入HRP标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”夹心结构。
   • 洗涤后加入底物（TMB），HRP催化显色（蓝色→黄色），颜色深浅与MDA浓度正相关。
2. 竞争法（部分试剂盒采用）：
   • 微孔板预包被MDA抗原，样本中的MDA与固相抗原竞争结合HRP标记的抗体。
   • 样本中MDA浓度越高，结合固相的酶标抗体越少，显色越浅，颜色深浅与MDA浓度负相关。

二、产品组成

试剂盒通常包含以下核心组件（以96孔配置为例）：

三、操作步骤汇总

以双抗体夹心法为例，操作流程如下：

1. 试剂准备：
   • 所有试剂和样本恢复至室温（18-25℃）。
   • 洗涤缓冲液稀释：蒸馏水按1:20稀释20×浓缩液。
   • 标准品稀释：按说明书梯度稀释（如0、0.5、1、2、4、8 nmol/mL）。
2. 加样与孵育：
   • 设置标准孔、样本孔和空白孔，每孔加入50μL标准品或样本（样本不足时可用稀释液调整）。
   • 每孔加入100μL HRP标记的检测抗体，封板膜封板，37℃孵育60分钟。
3. 洗涤：
   • 弃去液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩干，重复洗板5次。
4. 显色与终止：
   • 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。
   • 每孔加入终止液50μL，15分钟内测定OD值（450nm波长）。
5. 结果计算：
   • 以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（推荐使用四参数拟合）。
   • 根据样本OD值计算MDA浓度，若样本稀释需乘以稀释倍数。

四、关键注意事项

1. 样本处理：
   • 血清/血浆：离心后取上清，避免溶血。
   • 组织匀浆：按1:9（重量:体积）加入PBS，充分匀浆后离心取上清。
   • 细胞培养上清：离心后取上清，避免细胞碎片干扰。
2. 操作规范：
   • 洗板需 ，避免残留液体影响结果。
   • 显色时间严格控制（通常10-15分钟），避免颜色过深或过浅。
   • 终止液加入顺序与底物液一致，保证反应同步终止。
3. 结果判定：
   • 双抗体夹心法中OD值与浓度正相关，竞争法中负相关。
   • 若样本OD值高于标准曲线上限，需稀释后重新检测。
4. 储存条件：
   • 未开封试剂盒2-8℃保存，避免反复冻融。
   • 酶标板开封后需密封保存，剩余试剂建议1个月内用完。

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