实验原理

• 间接竞争 ELISA 法：样本中的 KTI 与预包被在酶标板上的 KTI 抗原竞争结合 KTI 抗体，加入酶标二抗后，通过 TMB 显色定量，样本吸光度值与 KTI 含量呈负相关。

精密度

• 批内差：同批次试剂盒对低、中、高值样本连续测定多次的变异系数（CV），一般要求<10%。
• 批间差：不同批次试剂盒对低、中、高值样本各重复测定多次的变异系数（CV），一般要求<15%。

试剂准备

• 标准品：根据说明书进行稀释，制备不同浓度的标准品。
• 检测抗体：HRP 标记的检测抗体，按说明书要求稀释后使用。
• 洗涤液：将浓缩洗涤液按比例稀释后备用。
• 底物液：TMB 显色液（A 液与 B 液 1:1 混合，避光保存）。
• 终止液：2M 硫酸溶液。
• 其他试剂：样本稀释液、封板膜、自封袋等。

实验步骤

• 样本提取：称取样本，加入提取工作液，进行提取。
• 样本稀释：离心后，用样本稀释液稀释样本，混匀待检。
• 加样：加入校准品/待测样本和抗体工作液，孵育。
• 洗板：用洗涤工作液洗板多次，拍干。
• 加酶：加入酶标试剂，孵育。
• 洗板：重复洗板步骤。
• 显色：加入显色液，孵育。
• 终止：加入终止液，酶标仪读数。
• 计算：将数据带入计算软件，对照标准曲线定量。

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