一、 检测原理

• 方法类型：双抗体夹心酶联免疫吸附法 (Sandwich ELISA)。
• 核心机制：
  1. 酶标板微孔预先包被特异性抗大豆11S球蛋白单克隆抗体。
  2. 样品中的11S球蛋白与包被抗体结合，形成“包被抗体-11S球蛋白”复合物。
  3. 加入生物素标记的检测抗体，形成“包被抗体-11S球蛋白-生物素化检测抗体”复合物。
  4. 加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶（SA-HRP），与生物素结合。
  5. 加入TMB底物显色（蓝色），加入终止液后变为黄色。
  6. 样品OD值与11S球蛋白含量呈正相关。
  7. 定量：通过标准曲线计算浓度，再乘以稀释倍数得到样品实际含量。
• 注：部分试剂盒可能采用间接竞争法，此时OD值与浓度呈负相关，具体以说明书为准。

二、 精密度指标

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• 检测范围：通常为 0.1–50 ng/mL 或 0.05–20 µg/g（依具体试剂盒而定）。
• 灵敏度（检测限）：通常 ≤ 0.05 ng/mL 或 0.1 µg/g。
• 批内精密度 (Intra-assay)：CV% < 10%。
• 批间精密度 (Inter-assay)：CV% < 15%。
• 标准曲线相关性：r ≥ 0.998。
• 加标回收率：95% ~ 。
• 特异性：不与7S球蛋白（β-伴大豆球蛋白）交叉反应。

三、 实验前准备

1. 试剂平衡：所有试剂（标准品、抗体、酶结合物等）从2-8℃冰箱取出，置于室温(20-30℃)平衡30分钟。
2. 洗涤液配制：将20×（或30×）浓缩洗涤液用蒸馏水按1:20比例稀释（如1份浓缩液+19份水）。若有结晶，水浴加热溶解。
3. 标准品配制：用标准品稀释液将冻干标准品进行2倍系列稀释，制备7个浓度梯度（如800, 400, 200, 100, 50, 25, 0 ng/mL）。
4. 工作液配制：
   • 使用前10分钟，用稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液。
   • 使用前10分钟，用稀释液将100×SA-HRP稀释成1×工作液。
5. 样品处理：
   • 固态食品：粉碎、匀浆，用PBS（含0.5% Tween-20）提取（1:10 w/v），离心（10,000×g, 15分钟）取上清。
   • 液态样本：直接稀释（1:100–1:1000）检测，高脂样本需脱脂处理。
   • 血清/血浆：离心（2000-3000g, 15-20分钟）取上清。
   • 组织/细胞：匀浆、离心（2000-3000g, 10-20分钟）取上清。
   • 稀释：根据预实验结果，用样品稀释液将样品稀释至标准曲线范围内。
6. 仪器耗材：酶标仪（450nm/630nm）、移液器及枪头、洗板机（或手工洗板）、封板膜、水平振荡器、EP管、量筒。

四、 实验步骤汇总

步：加样与孵育

步：洗涤

第三步：酶标孵育

第四步：显色

第五步：终止与读数

第六步：结果计算

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