一、 检测原理

本试剂盒主要采用双抗体夹心酶联免疫吸附法 (Sandwich ELISA)。

1. 包被：酶标板微孔预先包被特异性抗乳铁蛋白 (LTF) 抗体。
2. 加样与孵育：向孔中依次加入标准品/样品和HRP标记的检测抗体。样品中的LTF与包被抗体和酶标抗体结合，形成“包被抗体-LTF-酶标抗体”复合物。
3. 洗涤： 洗涤未结合的成分。
4. 显色：加入TMB底物，在过氧化物酶催化下显蓝色，加入终止液后变为黄色。
5. 测定：样品OD值与LTF含量呈正相关。
6. 定量：通过标准曲线计算浓度，再乘以稀释倍数得到样品实际含量。
   （注：部分试剂盒也可能采用间接竞争法，此时OD值与浓度呈负相关，具体以说明书为准。）

二、 精密度指标

• 
  
• 检测范围：通常为 12.5 μg/mL – 400 μg/mL 或 0.1-200 ng/mL（依具体试剂盒而定）。
• 灵敏度（检测限）：通常 ≤ 1.0 ng/mL 或 < 0.1 U/L。
• 批内精密度 (Intra-assay)：CV% < 10%。
• 批间精密度 (Inter-assay)：CV% < 15%。
• 标准曲线相关性：r ≥ 0.998。
• 加标回收率：95% ~ 。

三、 实验前准备

1. 试剂平衡：所有试剂（标准品、抗体、酶标二抗等）从冰箱取出，置于室温(20-30℃)平衡30分钟。
2. 洗涤液配制：将20×（或25×/30×）浓缩洗涤液用蒸馏水按1:20比例稀释（如1mL浓缩液+19mL水）。若有结晶，水浴加热溶解。
3. 标准品配制：用标准品稀释液将冻干标准品进行2倍系列稀释，制备7个浓度梯度（如400, 200, 100, 50, 25, 12.5, 0 ng/mL）。
4. 工作液配制：使用前10分钟，用稀释液将100×一抗和100×酶标二抗稀释成1×工作液。
5. 样品处理：
   • 血清/血浆：离心（2000-3000g，15-20分钟）取上清。
   • 组织/细胞：匀浆、离心（2000-3000g，10-20分钟）取上清。
   • 稀释：根据预实验结果，用样品稀释液将样品稀释至标准曲线范围内（常见稀释倍数为5倍）。
6. 仪器耗材：酶标仪（450nm/630nm）、移液器及枪头、洗板机（或手工洗板）、封板膜、水平振荡器、EP管、量筒。

四、 实验步骤汇总

步：加样与孵育

步：洗涤

第三步：加酶标二抗与孵育（若为竞争法）

第四步：显色

第五步：终止与读数

第六步：结果计算

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