一、 检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法 (Sandwich ELISA)。

1. 包被：酶标板微孔预先包被特异性抗维生素B2 (VB2) 抗体。
2. 加样与孵育：向孔中依次加入标准品/样品和HRP标记的检测抗体。样品中的VB2与包被抗体和酶标抗体结合，形成“包被抗体-VB2-酶标抗体”复合物。
3. 洗涤： 洗涤未结合的成分。
4. 显色：加入TMB底物，在过氧化物酶催化下显蓝色，加入终止液后变为黄色。
5. 测定：在450nm波长下测定吸光度(OD值)。样品OD值与VB2含量呈正相关。

二、 精密度指标

• 检测范围：0.938-600 ng/mL 或 0.075-2.4 nmol/L（依试剂盒而定）。
• 灵敏度： 检测浓度 < 1.0 ng/mL 或 < 0.1 nmol/L。
• 批内精密度 (Intra-assay)：CV% < 10%。
• 批间精密度 (Inter-assay)：CV% < 15%。
• 标准曲线相关性：r ≥ 0.9900。
• 加标回收率：95% ~ 。
• 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

三、 实验前准备

1. 试剂平衡：将所有试剂（标准品、抗体、酶结合物等）及样本从冰箱取出，置于室温(20-30℃)平衡20-30分钟。
2. 洗涤液配制：将20×（或25×）浓缩洗涤液用蒸馏水按1:20（或1:25）比例稀释（如1份浓缩液+19份水）。若有结晶，水浴加热溶解。
3. 标准品配制：用标准品稀释液将冻干标准品进行2倍系列稀释，制备7个浓度梯度（如400, 200, 100, 50, 25, 12.5, 0 pg/mL）。
4. 工作液配制：使用前10分钟，用稀释液将100×生物素化抗体和100×酶结合物稀释成1×工作液。
5. 样品处理：
   • 血清/血浆：离心(1000-3000×g, 10-30分钟)取上清。
   • 组织/细胞：匀浆、离心(3000-5000×g, 10-20分钟)取上清。
   • 保存：避免反复冻融，-20℃或-80℃保存。
   • 稀释：根据预实验结果，用样品稀释液将样品稀释至标准曲线范围内（常见稀释倍数为5倍）。
6. 仪器耗材：酶标仪(450nm)、高精度加样器及枪头、洗板机（或手工洗板）、封板膜、EP管、量筒、蒸馏水。

四、 实验步骤汇总

步：加样与孵育

步：洗涤

第三步：显色

第四步：终止与读数

第五步：结果计算

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