一、 检测原理

• 方法类型：间接竞争酶联免疫吸附法 (Indirect Competitive ELISA)
• 核心机制：样品中的2,4-TDI与板上包被的2,4-TDI-BSA偶联抗原竞争结合限量的特异性抗2,4-TDI抗体。
• 信号关系：样品吸光度（OD值）与2,4-TDI含量成负相关。
• 显色系统：TMB底物显色（蓝色），终止液终止后变为黄色。

二、 精密度指标

• 检测范围：1.5 ppb ~ 96 ppb
• 灵敏度（检测限）：1.5 ppb
• 批内精密度 (Intra-assay)：CV% < 10%
• 批间精密度 (Inter-assay)：CV% < 15%
• 标准曲线相关性：r ≥ 0.998
• 加标回收率：95% ~

三、 实验前准备

1. 试剂平衡：所有试剂（标准品、抗体、酶标二抗）置于室温（20-30℃）平衡30分钟。
2. 洗涤液配制：20×浓缩洗涤液用蒸馏水1:20稀释（如1mL浓缩液+19mL水）。
3. 标准品配制：用1×稀释液将标准品母液进行2倍系列稀释，制备所需浓度梯度（如96 ppb至1.5 ppb）。
4. 工作液配制：使用前10分钟，用1×稀释液将100×一抗和100×酶标二抗稀释成1×工作液。
5. 样品处理：根据样本类型（聚氨酯、涂料、胶粘剂等）进行提取、离心、稀释（建议预实验确定稀释倍数）。
6. 仪器耗材：酶标仪（450nm/630nm）、移液器及枪头、洗板机、封板膜、水平振荡器、EP管、量筒。

四、 实验步骤汇总

步：加样与孵育

步：洗涤

第三步：加酶标二抗与孵育

第四步：洗涤

第五步：底物显色

第六步：终止与读数

第七步：结果计算

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