一、 检测原理

本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附法 (Indirect Competitive ELISA)。

1. 包被： 酶标板微孔预先包被抑霉唑偶联抗原（IMZ-BSA）。
2. 竞争： 样品中的抑霉唑与板上包被的偶联抗原竞争结合限量的特异性抗抑霉唑抗体。
3. 结合： 加入酶标二抗（HRP标记），与一抗结合形成“包被抗原-一抗-酶标二抗”复合物。
4. 显色： 加入TMB底物，酶催化显色（蓝色）。
5. 测定： 加入终止液变为黄色，测定450nm吸光度（OD值）。
6. 定量： 样品OD值与抑霉唑含量成负相关，通过标准曲线计算浓度。

二、 精密度指标

• 检测范围： 0.5 μg/mL ~ 32 μg/mL
• 灵敏度（检测限）： 0.5 μg/mL
• 批内精密度 (Intra-assay)： CV% < 10%
• 批间精密度 (Inter-assay)： CV% < 15%
• 标准曲线相关性： r ≥ 0.998
• 加标回收率： 95% ~

三、 实验前准备

1. 试剂平衡： 所有试剂（标准品、抗体、酶标二抗）置于室温（20-30℃）平衡30分钟。
2. 洗涤液配制： 20×浓缩洗涤液用蒸馏水1:20稀释（如1mL浓缩液+19mL水），若有晶体需37℃加热溶解。
3. 标准品配制： 用1×稀释液将1000 μg/mL标准品母液进行2倍系列稀释，配制0.5、1、2、4、8、16、32 μg/mL共7个浓度梯度。
4. 工作液配制： 使用前10分钟，用1×稀释液将100×一抗和100×酶标二抗稀释成1×工作液。
5. 样品处理：
   • 谷物/果蔬： 粉碎样品，用70%甲醇水提取，震荡离心，取上清稀释（如1:4）后检测。
   • 血清/血浆： 离心分离上清。
   • 组织： 加入PBS震荡匀浆，离心取上清。
   • 注：若OD值超限，需适当增加稀释倍数。
6. 仪器耗材： 酶标仪（450nm/630nm）、移液器及枪头、洗板机、封板膜、水平振荡器、EP管、量筒。

四、 实验步骤汇总

步：加样与孵育

步：洗涤

第三步：加酶标二抗与孵育

第四步：洗涤

第五步：底物显色

第六步：终止与读数

第七步：结果计算

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