一、产品信息

• 通用名称：人溶血磷脂酸（LPA）定量检测试剂盒（ELISA法）
• 用途：定量检测人血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液等生物样本中LPA的含量。科学研究。
• 检测原理：采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。微孔板预先包被抗LPA抗体，样本中的LPA与抗体结合后，加入HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经洗涤后，加入底物TMB显色，颜色深浅与LPA浓度成正比。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本浓度。

二、试剂盒组成

三、样本收集、处理及保存方法

1. 血清：
   • 使用不含热原和内毒素的试管，避免细胞刺激。
   • 室温放置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟，取上清。
   • 保存：-20℃或-80℃，避免反复冻融。
2. 血浆：
   • 抗凝剂：EDTA、柠檬酸盐或肝素。
   • 采集后30分钟内，2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清。
   • 保存：-20℃或-80℃，避免反复冻融。
3. 组织匀浆：
   • 用预冷的PBS（0.01M，pH=7.4）冲洗组织，去除残留血液。
   • 称重后剪碎，按1:9（质量体积比）加入PBS，冰上充分研磨。
   • 可超声破碎或反复冻融以裂解细胞。
   • 5000×g离心5-10分钟，取上清。
   • 保存：-20℃或-80℃，避免反复冻融。
4. 细胞培养上清液：
   • 1000×g离心10分钟，去除颗粒和聚合物。
   • 保存：-20℃或-80℃，避免反复冻融。

四、检测步骤

1. 试剂准备：
   • 浓缩洗涤液：蒸馏水按1:20稀释。
   • 底物A、B：避光保存，现用现配。
   • 标准品：按说明书稀释至指定浓度。
2. 加样：
   • 设置标准品孔、样本孔和空白孔。
   • 标准品孔：各加不同浓度标准品50μL。
   • 样本孔：先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（稀释5倍）。
   • 空白孔：不加。
3. 温育：
   • 每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，封板膜封住反应孔。
   • 37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。
4. 洗涤：
   • 弃去液体，吸水纸上拍干。
   • 每孔加满洗涤液（350μL），静置1分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。
   • 重复洗板5次。
5. 显色：
   • 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。
6. 终止：
   • 每孔加入终止液50μL，15分钟内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

五、结果计算

1. 绘制标准曲线：
   • 以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在Excel工作表中绘制标准品线性回归曲线。
   • 通过曲线方程计算各样本浓度值。
2. 计算样本浓度：
   • 根据样本OD值，从标准曲线上查出对应浓度。
   • 乘以稀释倍数（本例中为5），即为样本实际浓度。

六、技术指标

• 检测范围：0.25μmol/L – 8μmol/L（部分试剂盒可达3.9ng/mL-250ng/mL）。
• 灵敏度： 检测浓度小于0.1μmol/L（或3.9ng/mL）。
• 特异性：不与其他可溶性结构类似物交叉反应。
• 重复性：
  • 板内变异系数（CV%）<10%。
  • 板间变异系数（CV%）<15%。

七、注意事项

1. 样本处理：
   • 避免使用含NaN₃的样本，因其会抑制HRP活性。
   • 样本溶血会影响检测结果，不宜使用溶血标本。
   • 样本收集后若不及时检测，应分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。
2. 试剂使用：
   • 试剂盒各组分使用前需平衡至室温（20-25℃）。
   • 浓缩洗涤液如有结晶，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
   • 底物A、B应避光保存，现用现配。
3. 操作规范：
   • 加样时避免气泡产生，确保加样量准确。
   • 温育过程中避免微孔干燥。
   • 洗涤要 ，避免非特异性显色。
   • 终止液加入顺序应与底物液一致，确保颜色均匀变化。
4. 仪器要求：
   • 使用标准规格酶标仪（含450nm波长滤光片）。
   • 确保仪器性能稳定，定期校准。

八、贮藏与有效期

• 贮藏条件：2-8℃，避光防潮保存。
• 有效期：6个月（具体以试剂盒说明书为准）。