一、产品信息

• 通用名称：人透明质酸（HA）定量检测试剂盒（ELISA法）
• 用途：本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人透明质酸（HA）的含量。

二、检测原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人透明质酸（HA）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并 洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人透明质酸（HA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

三、试剂盒组成

• 微孔酶标板
• 标准品
• HRP标记的检测抗体
• 底物溶液（TMB）
• 终止液
• 浓缩洗涤液
• 说明书

四、样本收集、处理及保存方法

• 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激。收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
• 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
• 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
• 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
• 保存：-20℃，

五、检测步骤

1. 试剂准备：从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。将浓缩洗涤液用蒸馏水按1:20稀释后备用。
2. 加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白孔不加。
3. 温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。
4. 洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。
5. 显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。
6. 终止：每孔加入终止液50μL，终止反应。
7. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

六、结果计算

• 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
• 计算样本浓度：由于样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

七、注意事项

• 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡20分钟后方可使用。
• 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
• 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
• 底物请避光保存。
• 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
• 所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
• 本试剂不同批号组分不得混用。